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色谱柱的特点和分类
  • 发布日期:2009-10-16      浏览次数:3486
    • 3-1 柱的结构
        1、堵棒(或导管)2、接头 3、接头 4、密封圈 5、螺帽 6、柱密封圈 7、柱管 8、柱填料 9 10、过滤片
         3-2 柱的分类:
      根据所有的担体材料分为三种:
        a.硅胶型:机械强度高,易制成小颗粒,理论塔板数高。
        b.聚全物型:在广泛的PH值范围内稳定
        c.羟基磷灰石型:对蛋白质等生物高分子样品有特殊的选择性。
      根据分离方式分类:
        a.硅胶型
         1) 正相:SIL--磷脂、NH--糖、维生素E,CN--甾类激素。
         2) 反相:ODS(C18)、(C8 CN TMS Pheny1)低分子量化全物。
         3) 离子交换:
           WAX(弱碱阴离子交换)--核苷酸、蛋白质
           WCX(弱酸阳离子交换)--蛋白质
           SAX(强碱阴离子交换)--核苷酸
           SCX(强酸阳离子交换)--儿茶酚胶
         4)凝胶过滤:
           Diol--蛋白质 GF--蛋白质
        b.聚合物型:
         1)反相:ODP--50--肽,蛋白质,低分化合物。
         2)离子交换:ISC--氨基酸,胍类化合物,ISA--糖,IC--无机离子,PA--蛋白质,ES--蛋白质。
         3)配位交换:SCR(磺化聚苯乙烯)--糖。
         4)离子排阻:SCR-101H 102H--有机酸
         5)凝胶过滤:ION--多糖 GS--水溶性分子
         6)凝胶渗透色谱(GPC):GPD--合成分子、橡胶。
         7)羟基磷灰石型:HPC--蛋白质、核苷酸
      按尺寸分类:
        1.制备:30mm 50mm 内径,半制备:20mm内径。
        2.分析:标准型柱:4_8mm内径。
            快速色谱柱:3mm内径、5cm长、4.6mm内径。
            小孔径柱:2.5mm内径,微孔径柱1mm内径。
      3-3柱的技术指标
        *耐压:不小于40Mpa。
        *渗透性:反相--流动相甲醇1ml/min,压力3Mpa。
             正相--正乙烷1ml/min,压力3Mpa.
        *柱效:理论塔板极数>3x103。
        *对称柱:葸峰不对称因子AS在0.8~2.0范围内。
        *外观:光洁、标牌、尺寸、填充剂、流动相方向、日期等。
      ODS柱
        ODS(C18)色谱柱是将十八烷基键合在担体的表面,然后填充的柱,在HPLC中应用广。在HPLC中反相色谱的引用占70%,其中极大部分 使用的是ODS(C18)。本公司所附的柱也是ODS(C18)柱,内径4.6mm,长度150mm。
      一般反相色谱系统,流动相为极性溶剂,如水、甲醇、乙腈,非极性固定相,如十八烷基。反相系统简单,重复性好,柱子能长期稳 定工作,能完成分离、分析任务的60-80%,所以分析工作者使用得zui多的是反相柱。
      柱的使用和维护
        由于柱的质量直接影响到样品组分得分离情况,组分的定性,定量分析,所以在操作时必须十分注意。
        通常柱子损坏表现为:柱压升高,柱效下降,保留值改变,峰形崎变等。
      以反相为列,它要求填料处于甲醇或乙腈中,不使柱子干枯,并注意下列事项:
        * 勿使柱子受较强振动
        * 较长时间不用时,应在柱中充满甲醇,并把两头封死,尽量不使干枯。
        * 当用水和甲醇(或乙腈)混合液体溶剂时,工作结束后必须用纯甲醇冲洗30分钟至1个小时,使柱子处于甲醇中,因水   易繁殖微生物, 使柱子堵塞,并降低柱效。
        * 当使用KH2PO4等缓冲液时,盐的浓度宜低,否则盐容易析出,柱效降低,柱压升高,使用后   必须用水冲洗( 绝不能用甲醇冲洗)使缓冲液全部溶于水排出,然后再用甲醇冲洗。
        * 硅基固定相不宜在PH>8时使用,此时容易产生絮状物析出,堵塞柱子。
        * 当流动相呈酸性时,使用后必须用水冲洗,因酸使柱效降低,后再用甲醇冲洗。
        * 流动相zui好经过过滤处理。
        * 样品zui好也经过过滤处理。
        * 样品有时能复盖填料得活性点,使柱压升高,保留时间下降,防止方法是样品经过过滤。
        * 样品组分的不可逆吸附,使柱压升高,柱效降低(通常易被吸附的有蛋白质、糖)防止方法是加保护柱和溶剂反冲,   zui常用的是四氢呋喃。
        * 当流动相从A换到B时,A、B不相溶,必须选择一能同A、B互溶剂C,先换成C再把C换成B,zui常用的中间液是异丙醇。
        * 由于长期使用,在较大的压力下,担体破裂而流失在柱前端形成一段空隙,使柱效下降,峰形畸变。维护方法:卸下   接头,用甲醇把填料调成糊状,填入柱内,同时将过滤片用超声波清洗机清洗一次。 
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